外泌體可以由體內(nèi)或體外培養(yǎng)的幾乎所有類型的細胞分泌,并廣fan存在于血漿,、膽汁,、尿液,、母乳、唾液,、胸腔積液,、淋巴、胃酸,、支氣管肺泡灌洗液,、腦脊液、眼淚,、滑膜液,、羊水、腹水,、鼻分泌物和子宮抽吸物液體等體液中,。目前,基于不同的分離原理,研究者建立了五種主要的提取純化技術(shù),分別為基于質(zhì)量密度的超速離心技術(shù),、基于粒徑大小的分離技術(shù)、基于溶解性質(zhì)的聚合物沉淀技術(shù),、基于免疫親和原理的分離技術(shù)和基于流體性質(zhì)的微流控技術(shù),。膜受體的識別是外泌體細胞反應(yīng)的基礎(chǔ)，它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號通路的活躍,。浙江CD63外泌體慢病毒

外泌體的組成較為復(fù)雜,，其內(nèi)含有多種生物大分子，如：核酸（雙鏈DNA和各種RNA亞型）,、蛋白質(zhì)和脂質(zhì),。這些分子被外泌體攜帶進入血液循環(huán)，而后被靶細胞吸收,，從而調(diào)節(jié)靶細胞基因表達和細胞功能,。此外，外泌體相關(guān)的miRNA作為短單鏈和非編碼RNA分子,，調(diào)節(jié)致病基因或抑病基因的表達,，參與細胞分化、細胞凋亡及細胞信號的傳導(dǎo),。有研究表明,，外泌體能影響種瘤微環(huán)境的形成、增強種瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力,、介導(dǎo)種瘤免疫壓制及參與種瘤放化療抵抗進而促進種瘤的發(fā)展,。浙江CD63外泌體慢病毒外泌體發(fā)揮功能方式：細胞-細胞之間的通訊，譬如抗原遞呈,，這是發(fā)揮功能的主要方式,。

外泌體（Exosome）介導(dǎo)瘤細胞的增殖過程。瘤細胞通過與自身微環(huán)境的信息交流促進瘤細胞的增殖,，而外泌體（Exosome）可以充當這種信息載體,。當細胞中出現(xiàn)基因突變時，外泌體（Exosome）會通過膜融合把這種突變信息傳遞至其他的正常細胞,，從而導(dǎo)致原病基因的喚醒,、抗凋亡基因的表達，使瘤細胞獲得增殖特性,。瘤細胞來源的外泌體（Exosome）還可以通過直接抑制免疫細胞,，促進瘤細胞逃避免疫監(jiān)視，為瘤細胞在體內(nèi)生長創(chuàng)造條件,。然而,，雖然當前外泌體生物學仍然不成熟，但越來越多的興趣和資金投入必將加速外泌體基礎(chǔ)研究進展和臨床轉(zhuǎn)化,。

外泌體的提取分離方法：1,、PEG-base沉淀法：聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物,，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等,，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑。2,、試劑盒提?。航鼛啄陙恚袌錾弦殉霈F(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,，有的是通過特殊設(shè)計的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分,，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來,。隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及醫(yī)學基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域,。

外泌體起源于多泡體,以細胞管腔內(nèi)囊泡的形式存在.細胞的胞吞形成帶有外源性抗體的內(nèi)體小泡,在高爾基體等細胞器的作用下形成早期核內(nèi)體,早期核內(nèi)體的囊膜內(nèi)陷,、突入形成多個小囊泡,并選擇性的接受細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸,、脂類等成分,較終形成晚期核內(nèi)體,晚期核內(nèi)體與細胞膜融合,并將外泌體排出胞外,。這是一個連續(xù)而又復(fù)雜的過程,從內(nèi)體小泡到成熟外泌體,需要在各細胞器間傳遞并包裝,包括:TSG101、Alix蛋白,、CD63,、CD81、神經(jīng)酰胺,、膽固醇等,。外泌體的排出跟其他胞內(nèi)小泡大致相同,受到Rab家族蛋白的調(diào)控,敲除細胞的Rab27a和Rab27b蛋白后,外泌體不能排出,且從高爾基體到晚期核內(nèi)體的囊泡運輸不受影響。外泌體可以通過多種方法給藥,，靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑,。臨床診斷級別外泌體

有報導(dǎo)指出，外泌體內(nèi)miRNA參與促進血管新生,、抗癥性和促進膠原蛋白沉淀等一系列過程,。浙江CD63外泌體慢病毒

外泌體的提取方法：免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,，特異性高,、操作簡單,、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,，不便進行下一步的實驗,。PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合,，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS,。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整,，純度較高,。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性,，外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射,。PS法可提取相當高純度的外泌體。色譜法,，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不寬泛,。浙江CD63外泌體慢病毒

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