外泌體的提取分離：1,、超濾離心。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,，大于一般蛋白質(zhì),，利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離，便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效,，且不影響外泌體的生物活性,，是提取細胞外泌體的一種新方法。2,、磁珠免疫法,。外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白）,，用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高,、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，但是效率低,，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實驗，難以普遍普及,。外泌體提?。河眠@種聚合物沉淀具有許多優(yōu)點，包括對分離的外泌體影響小,、pH中性等,。正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商
人體內(nèi)多種細胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細胞,、免疫細胞,、血小板、平滑肌細胞等,。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,，外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸,、脂類等來調(diào)節(jié)受體細胞的生物學(xué)活性,。外泌體介導(dǎo)的細胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結(jié)合，進而靶細胞細胞內(nèi)的信號通路,。二是在細胞外基質(zhì)中,，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結(jié)合,，從而細胞內(nèi)的信號通路,。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì),、mRNA以及microRNA,。正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商外泌體的提取方法：超濾離心。
在無菌條件下提取人體體液,，并用PBS緩沖液進行稀釋,，然后通過離心篩選初步去除體液中的細胞成分和細胞碎片，制成體液樣本備用,；體液樣本純化：通過過濾膜對上述體液樣本進行過濾,，進一步去除體液中的細胞殘片及其他雜質(zhì)，靜置10～15分鐘,，留取沉淀物備用,；外泌體提取：將上述沉淀物用PBS緩沖液進行懸浮,，使外泌體懸浮于液體上層,，然后用無菌針管吸取上層含有外泌體的液體，置于80℃儲存?zhèn)溆?。此提取方法條件復(fù)雜,，成本高，專利申請利用靜置不太可能把外泌體沉降下來,；根據(jù)外泌體表面的特異生物化學(xué)特性通過提取試劑的特異配方把外泌體從水相中沉降下來,。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標志物,。
外泌體的提取,、分離方法：聚合物沉淀法。聚合物沉淀法用于分離病毒和其他的生物大分子已有50多年歷史,，近幾年，將其作為一種新的方法來分離外泌體,。目前,，市場已經(jīng)有應(yīng)用聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)溶液提取外泌體的試劑盒，較常見的是SystemBiosciences公司的ExoQuick?和ExoQuick-TC?kits,，該試劑盒操作簡單不需要特殊的儀器,，但是價格昂貴。提取外泌體的試劑盒主要成分是PEG8000(30%~50%),將試劑盒與體液或細胞培養(yǎng)液4℃孵育過夜,，之后再低速離心,。外泌體提取色譜法是利用根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關(guān)系而對溶質(zhì)進行分離的分析的方法。
外泌體相關(guān)miRNA與肺病的診斷：miRNAs是一類含有20～25個核苷酸的非編碼小RNA,，能夠通過下調(diào)或壓制靶mRNAs來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄水平上的基因表達,，目前非編碼RNA被普遍發(fā)現(xiàn)存在于NSCLC患者外泌體中，參與一些病癥的形成和演化過程,。單個miRNA可能通過壓制性復(fù)合物與多個mRNA結(jié)合,，從而阻滯整個生物通路,。因此，外泌體的miRNA具有成為NSCLC標志物的優(yōu)勢,。Chen等在152例肺病患者的研究中初次報道了循環(huán)游離miRNA的表達,，與75例健康者相比，發(fā)現(xiàn)了兩種高表達的miRNA（miR-25和miR-223）,。Rabinonowits等對27例肺病患者和9例健康人的血漿外泌體中12個miRNA的表達進行了評估,，結(jié)果顯示，12個一些病癥相關(guān)的miRNA在肺病患者中過度表達,。Cazzoli等收集了30個血漿樣本,，發(fā)現(xiàn)4種外泌體miRNA（miR-378a、-379a,、-139-5p、-200b-5p）在肺病患者血清中明顯升高,，用于篩查患者與健康人ROC曲線下面積（AUC）為0.908,。離心除去細胞器，留取上清,。外泌體表面有其特異性標記物,，用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,。廈門外泌體提取試劑供應(yīng)商
對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā),。正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商
外泌體（Exosomes）是細胞分泌到胞外的一種囊泡（ExtracellularVesicles,，EVs），其大小為30-150nm,，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等）,，參與細胞間的分子傳遞,。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液,、唾液,、尿液、乳汁等,，同時也存在于組織樣本中,，如腦組織、肌肉組織,、脂肪組織等,。腦組織分離方法簡述：將腦組織剪成薄片,，放入離心管中加上消化液進行消化，經(jīng)水浴,、反復(fù)輕輕上下顛倒,，再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,，混勻,，置于冰上。再進行一系列的差速超速離心過程,，包括除雜,、濾膜過濾、超離等,。較后用PBS重懸外泌體,，用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡（TEM）、納米粒徑追蹤分子（NTA）和markerWB鑒定,。來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商
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