外泌體的提取,、分離方法：聚合物沉淀法。聚合物沉淀法用于分離病毒和其他的生物大分子已有50多年歷史,，近幾年,，將其作為一種新的方法來分離外泌體。目前,，市場已經有應用聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)溶液提取外泌體的試劑盒,，較常見的是SystemBiosciences公司的ExoQuick?和ExoQuick-TC?kits，該試劑盒操作簡單不需要特殊的儀器,，但是價格昂貴,。提取外泌體的試劑盒主要成分是PEG8000(30%~50%),將試劑盒與體液或細胞培養(yǎng)液4℃孵育過夜，之后再低速離心,。利用不同截留相對分子質量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,，便可獲得外泌體。成都外泌體提取試劑平均價格
外泌體（exosome）,，特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡,。其主要來源于細胞內內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體，經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中?，F已證實可以分泌外泌體的細胞有：肥大細胞,、淋巴細胞、樹突狀細胞,、瘤細胞,、間充質干細胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞,、瘤的生長與遷移,、組織損傷的修復等生理病理上起著重要的作用。同時,，不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,，可作為疾病診斷的生物標志物。細胞外囊泡是蛋白質,、mRNA,、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介，根據它們的大小和發(fā)生分為三類，包括外泌體,、微泡和凋亡小體,。其中，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,，由多種細胞分泌，內含有特定的蛋白質,、脂質,、細胞因子或遺傳物質。來源于不同的組織的外泌體不光具有其特異性蛋白分子,，而且還包含其行使功能的關鍵分子,。重慶正規(guī)外泌體提取試劑在體內參與細胞通訊、細胞遷移,、促血管新生和抗一些病癥免疫等生理過程,，與多種疾病的發(fā)生和進程密切相關。
外泌體的提取分離：1,、超濾離心,。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體，大于一般蛋白質,，利用不同截留相對分子質量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,，便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效,，且不影響外泌體的生物活性,，是提取細胞外泌體的一種新方法。2,、磁珠免疫法,。外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白）,，用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高,、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，但是效率低,，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實驗，難以普遍普及,。
外泌體的提取方法學規(guī)范,、統一定量及鑒定等。關于外泌體的提取有超速離心、試劑盒,、超濾法,、蔗糖密度梯度離心等，然而各種方法均有其利弊,。超速離心法是目前外泌體相關文章中的主流方法,，由于離心步驟繁瑣，費事費力,，而且步驟多導致實驗中容易污染,，且損耗量大，使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定,。而且對于抽提細胞上清來說,，更是極為不請便，試想用提取300ml的上清需要6個50ml離心管,，無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀,，都具有操作極其不便的缺點，總之非常麻煩,。而超濾法存在外泌體會堵塞膜孔,，造成濃縮效率低，濃縮管重復利用差,，甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會粘連成團,，造成損失及較后的數據有誤差，對于后續(xù)實驗也有影響,。聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質分子結合共沉淀,。
研究探討了外泌體是否可以作為RNAi的有效載體的可能性。與脂質體和其他合成藥物納米顆粒載體不同,，外泌體含有可能增強內吞作用的跨膜和膜錨定蛋白,，從而促進其內容物的遞送。CD47是外泌體蛋白質之一,，是一個普遍表達的整合素相關跨膜蛋白,，其部分功能可以保護細胞免受吞噬作用。CD47是信號調節(jié)蛋白α（SIRPα,，也稱為CD172a）的配體,，CD47-SIRPα間的結合能夠發(fā)出“不要吃我”的信號，從而壓制吞噬作用,。病基因RAS能夠促進胰腺病細胞增殖,，增強胞飲作用從而促進一些病癥細胞攝取外泌體。合成納米顆粒對細胞有一定毒性作用,，但使用外泌體能夠較小化對細胞的毒性,。研究人員發(fā)現,，CD47和病基因KRAS驅動的胞飲作用都會壓制外泌體被循環(huán)系統的清理，并增強胰腺病細胞對外泌體的特異性,。所以,，外泌體的這種特性增強了它們通過遞送RNAi來特異性靶向胰腺病中的KRAS的能力，并且使用外泌體作為單一靶向劑顯著改善了所有實驗PDAC小鼠模型的總生存期,。外泌體的提取有超速離心,、試劑盒、超濾法,、蔗糖密度梯度離心等,，然而各種方法均有其利弊。正規(guī)外泌體提取試劑哪家好
如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一,，產生難以去除的聚合物,。成都外泌體提取試劑平均價格
目前的主流觀點認為，外泌體的產生過程為：細胞膜內陷,，形成內體（endosome）,，再形成多泡體（multivesicularbodies，MVB）,，較后分泌到胞外成為外泌體,。外泌體中攜帶有母細胞的多種蛋白質、脂類,、DNA和RNA等重要信息,。外泌體較早見于1981年，EGTrams等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細胞上清液中發(fā)現了有膜結構的小囊泡,，并命名為exosome,。對于外泌體的作用，當時推測為細胞排泄廢物的一種方式,。1996年GRaposo等發(fā)現類似于B淋巴細胞的免疫細胞也會分泌抗原呈遞外泌體（antigenpresentingvesicle）,，所分泌的外泌體可以直接刺激效應CD4+細胞的抗一些病癥反應。2007年HValadi等進一步發(fā)現細胞之間可以通過外泌體中RNA交換遺傳物質,。隨著有關外泌體研究越來越多,，研究者發(fā)現它普遍參與了機體免疫應答、抗原呈遞,、細胞分化,、一些病癥生長于侵襲等各種生物過程中。目前人們多采用超速離心,、免疫磁珠,、超濾,、沉淀或試劑盒等方法實現外泌體的提取分離。成都外泌體提取試劑平均價格
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